Studenti budou umět:

Vybrat vhodnou analytickou metodu s odpovídajícím detekčním limitem.

Aplikovat zvolenou metodu na analýzu vzorků různého původu.

Získají schopnost orientace ve specializované odborné literatuře z oblasti studia biomolekul.

Přehled o širokém spektru bioanalytických metod včetně možností a limitů jejich aplikace.

Students will be able to:

Choose suitable analytical method with appropriate detection limit.

Apply the chosen method for samples of different origin.

Orientate themselves in specialized literature concerning biomolecules issue.

Obtain wide knowledge of bioanalytical methods spectra including possibility and limits of their application.

Ústní zkouška

Oral examination

Z: Králová B., Rauch P., Bioanalytické metody, Vydavatelství VŠCHT Praha, 2. vydání 1995, ISBN 80-7080-449-1

Z: Králová B., Rauch P., Fukal L., Bioanalytická chemie, Vydavatelství VŠCHT Praha, 2007, ISBN 80-7080-449-1

Z: Káš J., Kodíček M., Valentová O., Laboratorní techniky biochemie, Praha 2005, ISBN 80-7080-586-2

Z: Ruml T., Rumlová M., Pačes V., Genové inženýrství, Praha 2002, ISBN 80-7080-499-8

Z: Daussant J., Desvaux F.-X., Introduction to immunochemical techniques for medical diagnosis, food quality control and environmental testing, 2007, ICT Press, 9788070806418

R: Králová B., Rauch P., Bioanalytické metody, Vydavatelství VŠCHT Praha, 2. vydání 1995, ISBN 80-7080-449-1

R: Králová B., Rauch P., Fukal L., Bioanalytická chemie, Vydavatelství VŠCHT Praha, 2007, ISBN 80-7080-449-1

R: Káš J., Kodíček M., Valentová O., Laboratorní techniky biochemie, Praha 2005, ISBN 80-7080-586-2

R: Ruml T., Rumlová M., Pačes V., Genové inženýrství, Praha 2002, ISBN 80-7080-499-8

R: Daussant J., Desvaux F.-X., Introduction to immunochemical techniques for medical diagnosis, food quality control and environmental testing, 2007, ICT Press, 9788070806418

1. Definice bioanalytických metod jako metod založených na biologickém rozpoznání.

2. Enzymy jako analytická činidla - teoretický úvod, kinetika enzymových reakcí.

3. Metody stanovení substrátů, aktivátorů a inhibitorů enzymových reakcí. Využití enzymů ve volné a imobilizované formě.

4. Využití enzymových metod v klinické a experimentální praxi.

5. Princip imunochemických metod. antigeny, hapteny , charakterizace interakcí antigen-protilátka.Protilátky (výskyt,funkce molekuly imunoglobulinu) Buněčná podstata imunitní odpovědi.

Protilátky: příprava, použití, polyklonální, monoklonální, rekombinantní.

6. Rozdělení imunochemických metod.Imunoprecipitační metody a jejich využití v praxi, precipitace v roztoku, aglutinace, pasivní aglutinace.

7. Citlivé imunochemické techniky (ELISA).

8. Bioanalytické metody využívající radionuklidy (vhodné radionuklidy, poločasy rozpadu, metody detekce, značení protilátek) RIA, radiometrické metody, práce s radionuklidy.

9. Bioafinitní chromatografie, afinitní precipitace, imunoafinitní biosenzory, FACS.

10. Elektroforetické metody a jejich význam v analytice.

Imunoblot - detekce, izolace a charakterizace proteinů po dělení elektroforetickými metodami a jejich význam v analytice, barevná a chemiluminiscencční detekce. Imunoelektroforetické metody.

SDS elektroforesa, kapilární elektroforesa.

11. Hmotnostní spektrometrie biomolekul.

12. Biochemické a mikrobiologické metody v analytice.

13. Genetické metody.

Polymerasová řetězová reakce (PCR), RT-PCR detekce specifických sekvencí produktu in situ, DNA a RNA čipy, příklady praktického použití genetických metod ve srovnání s dříve probranými metodami.

14. Detekční limity a použití vybraných bioanalytických metod.

1. Bioanalytical methods definition, principle and practical applications.

2. Enzyme usage in analysis. Systematic classification of enzymes, enzyme kinetics.

3. Experimental techniques of enzyme methods. Determination of substrates and metabolites of enzyme reactions. Immobilized enzymes.

4. Application of enzyme methods in clinic analyses and food industry.

5. Imunochemistry -principle of immunochemical methods, antibodies, antigens.

6. Immunoprecipitation methods, application in practice

7. Sensitive immunochemical techniques (ELISA, immunoblot).

8. Methods with radionuclide application.

9. Methods based on molecular recognition. Bioafinity chromatography (incl. HAPLC), Imunosensors, FACS.

10. Electrophoretical methods:PAA,SDS, affinity electrophoresis, immunoelectrophoresis, Immunoblot. Capillary electrophoresis

11. Mass spectrometry in analysis of biomolecules.

12. Biological and microbiological methods

13. Genetical methods. Polymerase chain reaction, DNA and RNA array, fluorescence in situ, restriction analysis, DNA sequencing, application of genetical methods.

14. Detection limits and application of selected methods, Usage of modern analytical methods for biopolymers.

Další seznam doporučené literatury a odkazy na elektronické zdroje budou poskytnuty v rámci jednotlivých přednášek.

Additional list of suggested bibliography and electronic references will be provided within individual lectures.

Biochemie I

Biochemistry I